Библиографическое описание:Сравнительная оценка влияния состава питательной среды на эффективность выделения ДНК из грамположительных микроорганизмов / Екатерина Германовна Лазарева, Дарья Дмитриевна Коваль, Алексей Владимирович Хан [и др.]. - (Биотехнология). - Текст : непосредственный // Пищевая промышленность. - 2025. - № 9. - С. 159-164 : 3 табл., 1 рис. - Библиогр.: с. 163-164 (20 назв.). - ISSN 0235-2486.
Аннотация:Эффективное выделение ДНК из грамположительных молочнокислых бактерий представляет собой важную задачу для молекулярной микробиологии, что связано с активным внедрением в лабораторную практику высокоточных методов генетического анализа, таких как ПЦР в реальном времени и секвенирование нового поколения (NGS). Ввиду особенностей строения клеточной стенки, содержащей плотный пептидогликановый слой, для эффективного лизиса клеток необходима адаптация протоколов пробоподготовки. Предполагается, что тип питательной среды, используемой при культивировании бактерий, способен оказывать влияние на выход и качество экстрагируемой ДНК. В настоящей работе проведена сравнительная оценка влияния двух питательных субстратов - стерилизованного молока и молочного гидролизата - на эффективность экстракции ДНК из культур Streptococcus thermophilus и Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. Для анализа использовали 5 коммерческих наборов, основанных на различных методах лизиса и очистки нуклеиновых кислот. Показано, что молочный гидролизат, как правило, обеспечивает более высокий выход ДНК и лучшие показатели чистоты, определяемые по соотношениям оптической плотности при 230, 260 и 280 нм A260/280 и A260/230), особенно при использовании методов на основе солевого осаждения и сорбции на силика-носителях. Результаты количественного и качественного анализа выделенной ДНК были подтверждены амплификацией фрагментов 16S рРНК в формате ПЦР-РВ. Установлено, что эффективность амплификации тесно коррелирует с чистотой исходного материала. Также выявлены видоспецифические особенности в выходе и качестве ДНК, обусловленные составом питательных сред и различной устойчивостью бактериальных клеток к использованным лизирующим агентам. Таким образом, работа подчёркивает необходимость осознанного подбора питательной среды и метода экстракции при подготовке образцов для молекулярного анализа. Полученные данные могут быть использованы для оптимизации протоколов пробоподготовки в исследованиях, направленных на оценку микробного разнообразия, а также при разработке диагностических и биотехнологических решений для пищевой промышленности.
