Библиографическое описание:КИНЕТИКА СОБСТВЕННОЙ ЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЛЮЦИФЕРАЗЫ В ХОДЕ КАТАЛИЗА ОТРАЖАЕТ СВЯЗЫВАНИЕ ФЛАВИНА И РЕАКТИВАЦИЮ ФЕРМЕНТА : научное издание / А. Е. Лисица [и др.]. - Текст : непосредственный // Доклады Российской академии наук. Науки о жизни. - 2026. - Т.528, №1. - С. 313-320. - Получение отдельных субъединиц бактериальных люцифераз и исследование их свойств выполнено в рамках государственного задания Министерства науки и высшего образования РФ (FWES-2024-0018). Исследование кинетики триптофановой флуоресценции люцифераз в ходе катализа выполнено при финансовой поддержке Российского научного фонда в рамках проекта № 25-24-00617. - ISSN 2686-7389. - ISSN 3034-5057, DOI 10.7868/S3034505726030159.
Аннотация:В работе предложен экспериментальный метод регистрации скоростей отдельных стадий реакции, катализируемой бактериальной люциферазой, основанный на триптофановой флуоресценции фермента и методе остановленного потока. Обоснована связь интенсивности флуоресценции триптофановых остатков люциферазы с присутствием субстратов и продуктов реакции в активном центре фермента. Проанализирована нестационарная кинетика биолюминесценции в реакции двух видов бактериальных люцифераз с алифатическими альдегидами с разной длиной цепи, а также кинетика интенсивности флуоресценции ферментов в ходе реакции. Получены результаты, подтверждающие связь скорости двух кинетических стадий люминесценции фермента с процессами связывания флавинового субстрата и восстановления активности фермента после каталитического акта.
The study proposes an experimental approach to determining the rates of individual stages of a reaction catalyzed by bacterial luciferase, based on the tryptophan fluorescence of the protein and the stopped-flow technique. The relationship between the fluorescence intensity of luciferase's tryptophan residues and the presence of substrates and reaction products in the enzyme's active site is substantiated. The non-steady-state kinetics of bioluminescence in the reaction of two bacterial luciferases with aliphatic aldehydes of different chain lengths, as well as the kinetics of enzyme fluorescence intensity during the reaction, were analyzed. The obtained results confirmed the relationship between the rate of the two kinetic stages of enzyme luminescence and the processes of flavin substrate binding and enzyme activity recovery after the catalytic act.
