Библиографическое описание:Увеличение яркости флуоресценции сверхфотостабильного мутанта EGFP путем внесения мутаций, блокирующих протонирование хромофора / А. В. Мамонтова, А. М. Шахов, А. П. Григорьев [и др.]. - Текст : непосредственный // Биоорганическая химия. - 2020. - Т. 46, № 6. - С. 770-783 : 6 рис., 3 табл. - Библиогр.: с. 780-782 (64 назв. ). - ISSN 0132-3423.
Аннотация:Дизайн флуоресцентных белков с увеличенной фотостабильностью - важная практическая задача. Один из подходов к ее решению связан с поиском аминокислотных остатков, играющих ключевую роль в фотохимических реакциях с участием хромофора. Ранее было продемонстрировано влияние тирозина-145 на фотоокисление хромофора зеленого флуоресцентного белка EGFP (enhanced green fluorescent protein, улучшенный зеленый флуоресцентный белок), а также получен мутант EGFP-Y145L, в котором эффективность фотоокисления и связанного с ним фотообесцвечивания существенно снижены. Ищем пути увеличения яркости флуоресценции этого мутантного варианта, вводя в него замены S205V и E222G и их комбинацию с целью сдвига pH-равновесия хромофорного окружения в сторону ионизации хромофора. Показано, что оба варианта белка с заменой S205V несут в основном нейтральный хромофор, имеют низкую яркость и способны к медленной фотоактивации. Они могут представлять интерес для изучения светозависимого переноса протона и, возможно, функционировать в качестве времяразрешенных pH-сенсоров. В белке EGFP-Y145L/E222G, хромофор пребывает преимущественно в анионной форме. Этот мутантный вариант характеризуется яркостью флуоресценции, в 4 раза превосходящей таковую у исходного EGFP-Y145L и фотостабильностью в 1. 5-5 раз выше, чем у EGFP.
